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Détermination des séquence en acides aminés : la dégradation de P. Edman [Pehr Edman (1950) Acta Chem. Scand. 4, 283] |
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a. Dérivation du 1er acide aminé : la fonction a-aminée (NH3+) de l'acide aminé en position N-terminale (le "premier" de la chaîne polypeptidique) réagit avec le phényl isothiocyanate (PITC) et on obtient le dérivé phénylthiocarbamyle de cet acide aminé. b. Coupure : l'action de l'acide trifluoroacétique (F3CCOOH) libère la forme thiazolinone de l'acide aminé N-terminal. Les liaisons entre les autres acides aminés (liaison peptidique) demeurent intactes. c. Formation du PTH-acide aminé N-terminal : l'anilinothiazolinone est extraite et est transformée dans l'eau en la forme phénylthiohydantoïne (PTH) de l'acide aminé N-terminal. d. Séparation et identification du PTH-acide aminé N-terminal : celui-ci est séparé du reste de la chaîne polypeptidique intacte par chromatographie liquide à haute performance (HPLC). e. Suite du séquençage : le cycle complet est recommencé. Cette fois l'acide aminé qui réagit est l'acide aminé 2 qui est devenu le nouvel acide aminé en position N-terminale. |
