Les gels Sepharose 4B™ et Sepharose 6B™ possède des bras espaceurs :

a) AH - Sepharose 4B™ est obtenu par formation d'une liaison covalente entre le 1,6 diaminohexane et le gel Sepharose 4B™ par la méthode au bromure de cyanogène. Il possède un bras à 6 atomes de carbone et une amine libre à l'extrémité qui permet la fixation d'un groupe carboxyle.

b) CH - Sepharose 4B™ est obtenu par formation d'une liaison covalente entre l'acide 6-aminohexanoïque et le gel Sepharose 4B™ par la méthode au bromure de cyanogène. Il possède un bras à 5 atomes de carbone et un groupe carboxyle libre à l'extrémité qui permet la fixation d'un groupe amine primaire.

c) CH - Sepharose 4B™ activé par un groupe succinimide (ester actif pour la fixation de groupe aminés).

d) Sepharose 6B™ activé par un groupe epoxyde.

 

 

La présence d'un bras espaceur peut s'avérer critique pour la fixation correcte du ligand sur la protéine à purifier. Par exemple :

• l'acide UDP - glucuronique a été couplé à l'extrémité aminée du gel AH - Sepharose 4B™ qui contient un bras à 6 atomes de carbone ;

• ce ligand a permis de purifier en une seule étape la collagène - glycosyltransférase de poulet

• l'enzyme fixée a été éluée par compétition avec des fragments peptidiques du collagène

Source figures : "Chromatographie d'affinité", Pharmacia® et "Enzymes" Pelmont (1995), Presses Universitaires de Grenoble