L3 - Septembre 2004 - Enzymologie
Partie A. tracés graphiques et détermination des paramètres cinétiques
  • On remarque que quand la concentration de A augmente et celle de B augmentent, la vitesse initiale augmente : A et B sont deux substrats (2ème possibilité).
  • Il s'agit d'un mécanisme ordonné : A se fixe en premier avec KMA = 0,16 mM

 

 

 

 

 

Il n'y a pas de graphe secondaire pour A puisque B se fixe en second.

 

A partir du graphe primaire pour B, on obtient les valeurs suivantes qui permettent de tracer le graphe secondaire pour B :

[B0] (µM)
1/[B0] (µM-1)
1/VMax[B0] (UA-1.min)
0,3
3,33
0,128
0,5
2
0,103
0,8
1,25
0,089
1,05
0,95
0,082

 

 

On trouve : VMax  = 15,63 UA.h-1 

D'après la relation de Beer - Lambert et avec eM = 16270 M-1.cm-1 et l = 1 cm :

                                        15,63
              VMax   =   -------------------   =   9,6 10-4 M.h-1 = 960 µM.h-1 = 0,27 µM.sec-1
                                     16270 x 1

 

                                                VMax
                 ==>   kcat   =   ----------------   =  38 sec-1
                                                 [E]0

 
Partie B. Schéma du mécanisme réactionnel tenant compte des molécules E, A, B, C et I et des différentes constantes déterminées
 
KMA
  
KMB
  
kcat
  
E   +   A  
<======>
EA   +   B
<======>
EAB
---------->
E + P
   + C    KI
  
   + I    KI
        
         EC
  
         EAI