L'élution du gel de filtration se fait en fonction des masses molaires décroissantes. Le complexe enzyme - inhibiteur correspond au pic 1 et l'inhibiteur libre au pic 2.

Donc : Pic 1 = inhibiteur LIÉ ; pic 2 = inhibiteur LIBRE

[I]lié (µM)	[I]libre (µM)	[E]totale (µM)	nu = [I]lié / [E]tot	nu / [I]libre (µM-1)
10	5.60	100	0.100	0.0179
20	12.3	100	0.200	0.0163
40	34.0	100	0.400	0.0118
55	60.0	100	0.550	0.00917
70	117	100	0.700	0.00598
90	437	100	0.900	0.00206

Remarque : 1 molécule d'inhibiteur se fixe par molécule d'enzyme.

• masse molaire de l'enzyme = 25 kDa
• masse molaire du complexe = 75 kDa
• ==> masse molaire de l'inhibiteur = 50 kDa

Une stoechiométrie 1:1 est donc cohérente :

• avec la masse molaire du complexe ;
• avec l'ordre d'élution : complexe puis inhibiteur (l'enzyme libre étant exclue du gel)

Partie B

1. En absence d'inhibiteur : V_Max  = 1,18 UA.min^-1 

D'après la relation de Beer - Lambert et avec e_M = 2600 M^-1.cm^-1 et l = 1 cm :

                                        1,18
              V_Max   =   -----------------   =  4,5 10^-4 M.min^-1 = 7,5 µM.sec^-1
                                     2600 x 1

                                                V_Max
                 ==>   k_cat   =   ----------------   =  278 sec^-1
                                                 [E]₀

  2. En présence de l'inhibiteur : V_Max^app = 1,9 10^-4 M.min^-1 = 3,2 µM.sec^-1

• V_Max^app < V_Max

• K_M^S est inchangé

• ==>   inhibition non compétitive

                                   V_Max^app   .    [I]₀
          et :   K_I   =   -------------------------------   =   6,7 mM
                                 (V_Max -V_Max^app)