Correction Examen licence enzymologie janvier 2003

L3 - Janvier 2003 - Enzymologie (8 points)

A.Vitesse initiale de la réaction (en µM.min^-1) pour différentes concentrations de S et de A

On remarque qu'il n'y a que S et A et quand la concentration de A augmente, la vitesse initiale augmente : A est un second substrat.

Il s'agit d'un mécanisme ordonné avec K_M^S = 1,25 mM

B.Vitesse initiale de la réaction (en UA.min^-1) pour différentes concentrations de S et de B (en présence de A à une concentration maintenue fixe)

On remarque qu'il y a S et A et B.

Quand la concentration de B augmente, la vitesse initiale diminue : B est un inhibiteur.

[B] = 0 µM : 1/V_Max = 1 UA^-1.min ==> V_Max = 1 UA.min^-1

D'après la relation de Beer - Lambert et avec e_M = 1230 M^-1.cm^-1 et l = 1 cm :

                                           1
              V_Max   =   ----------------   =   8,1 10^-4 M.min^-1 = 810 µM.min^-1
                                     1230 x 1

                                                V_Max
                 ==>   k_cat   =   ----------------   =   9 10⁷ min^-1= 1,5 10⁶ s^-1
                                                 [E]₀

[B] = 0,5 µM : V_Max^app = 5,4 10^-4 M.min^-1 = 540 µM.min^-1

[B] = 3 µM : V_Max^app = 4,1 10^-4 M.min^-1 = 410 µM.min^-1

Donc :

V_Maxdiminue
K_M^S est inchangé en absence et en présence d'inhibiteur (K_M^S= 1,25 mM)

==> Il s'agit d'une inhibition non compétitive.

                                   V_Max^app   .    [B]₀
          et :   K_B   =   -----------------------------   =   1 10^-6 M = 1 µM
                                 (V_Max-V_Max^app)

C. Schéma du mécanisme réactionnel tenant compte des molécules E, S, A et B et des différentes constantes déterminées

K_M^S k_cat
E + S <======> ES + A <==> ESA ----------> E + P
+ B K_B + B K_B + B K_B
EB + S <======> ESB + A <==> ESBA